PEG

Полиэтиленгликоль - Водорастворимый неионный полимер, получаемый полимеризацией этиленоксида с раскрытием цикла. В зависимости от средней молекулярной массы полимера — вязкая жидкость, гелеобразное или твёрдое вещество. Например, PEG-8000 — это полимерный этиленгликоль с молекулярной массой 8000 Да. PEG подвергается окислению в присутсвии кислорода, что можно предотвратить охлаждением. Растворимость в воде 630 г/л.

Полимерный полиэтиленгликоль способен вытеснять молекулы ДНК из водных растворов в присутствии катионов Na, K или Mg. Опуская физическую природу явления, кратко этот эффект можно объяснить следующим образом: полимер PEG заполняет объем реакционной смеси, выталкивая ДНК в оставшееся пространство (больше PEG - меньше свободного пространства). В то же время положительно заряженные катионы притягиваются к отрицательно заряженным фосфатным группам нуклеиновой кислоты и экранируют заряд ДНК. В результате экранирования и в отсутсвие достаточного пространства длинные молекулы ДНК конденсируются и выпадают в осадок, тогда как короткие молекулы ДНК остаются растворены в свободном пространстве водной фазы. Таким образом, чем выше концентрация PEG и катионов, тем короче молекулы ДНК, выпавшие в осадок.Для переосаждения ДНК мы используем PEG-8000. В качестве стока мы используем 3-х кратный раствор с 30 мМ хлоридом магния. Концентрация хлорида магния имеет принципиальное значение.

В качестве стока мы используем 3-х кратный раствор PEG с 30 мМ хлоридом магния. Концентрация хлорида магния имеет принципиальное значение, поскольку осаждение ДНК эффективно только при концентрации 10 мМ Mg2+.

3-x кратный стоковый раствор PEG-8000+30мМ MgCl2

  • Развести 30 мМ раствор MgCl2 из 1М стока с помощью mQ:
5 мл 10 мл 20 мл 30 мл 50 мл 100 мл
1M MgCl2 15 mkl 30 мкл 60 мкл 90 мкл 150 мкл 300 мкл
mQ 4985 mkl 9970 mkl 19.94 ml 29.91 ml 49.85 ml 99.7 ml
  • Навесить нужное количество PEG-8000
Размер осажденной ДНК (в 1xPEG) % раствора\V раствора 5 мл 10 мл 15 мл
>100bp 45% 2.25 г 4.5 г 6.75 г
>300bp 30% 1.5 г 3 г 4.5 г
>500bp 18% 0.9 г 1.8 г 2.7 г
>700bp 15% 0.75 г 1.5 г 2.25 г
>1000bp 12% 0.6 г 1.2 г 1.8 г

  • Постепенно перемешивая, добавлять 30 мМ MgCl2 до конечного объема

  • Стерилизовать через 0.45 mkm фильтр, расфасовать

Опыт показывает, что 0.22 мкм фильтр тоже подходит.

  • Хранить при -20С

Sigma советует растворять PEG в горячей воде (80-90С)

Инструкция от Sigma