Tris
1M Tris·HCl
трис(гидроксиметил)аминометан - широко используемый буферный агент с буферным интервалом 7.0-9.0. Применяется для приготовления электрофорезных буферов (ТАЕ, ТBЕ и др.), реакционных буферов, буферов для элюции и прочего. Растворы Tris имеют щелочную реакцию, так что буферы с добавлением HCl называют Tris·HCl или Tris·Cl, тогда как буферы без кислоты или с добавлением щелочи (NaOH или KOH) называют Tris Base. В любом случае указывается концентрация Tris, а не добавок.
Трис ингибирует некоторые клеточные ферменты, такие как аденилатциклаза, пируват дегидрогеназа, уреаза. Ингибирование происходит в т.ч. за счет связывая ионы металлов. Вероятно, поэтому в ряде случаев Tris заменяют на HEPES.
Производители дают развернутое описание для буферных растворов на основе Трис. В частности, хорошо задокументирована зависимость pH буфера от температуры: чем ниже температура, тем ниже pH. Как правило, изменения pH достигают 0.05 единиц на градус Цельсия. Уменьшение концентрации Трис в 10 раз приводит к уменьшению pH на 0.05 единиц. Кроме того, производители предостерегают от использования серебряных электродов для измерения pH Трис-буферов, поскольку Трис взаимодействует с серебром с выпадением осадка, что нарушает показани pH-метра. Перед приготовлением раствора стоит убедиться, что прибор приспособлен для работы с буферами на основе Трис.
Стоковые растворы Tris, как правило, готовят с концентрацией 1 M.
- Для получения желаемого объема 1М Tris нужно навесить
| 50 мл | 100 мл | 200 мл | 250 мл | 500 мл | 1 л | |
|---|---|---|---|---|---|---|
| Трис основание (Tris bas | e), Mw 15 | 7.6 | 7.8 | 8 г | 15. | 8 г | 31. | 5 г | 39. | 4 г | 78.8 г | 157.6 г |
-
Добавить 80% от запланированного объема mQ
-
Довести pH до нужной величины добавлением HCl (чтобы понизить pH). Иногда pH требуется поднять, тогда используется NaOH. В процессе добавления щелочи или кислоты раствор будет нагреваться, так что измерения pH нужно проводить до тех пор, пока раствор не дойдет до комнатной температуры.
Добавление щелочи или соляной кислоты увеличивает осмолярность буфера, что нужно будет учитывать при приготовлении клеточных сред
-
Довести до запланированного объема добавлением mQ
-
Стерилизовать через 0.22 мкм фильтр. Автоклавировать не стоит, так как это может изменить pH
-
Хранить при КТ